•如果您想在搜索中包括CL的氧化剂,建议在数据库设置选项卡中创建一个专用参数。要保存设置,请选中[save Option]复选框,输入任意名称,然后单击[Submit
功能特色
1、自动脂质鉴定
针对LC数据相关的MS/MS定制了独特的峰检测算法,包括结合来自CID/HCD碎片和MS的信息2/女士3使用赛默飞世尔科技 Orbitrap ID-X 和 Fusion Tribrid 质谱仪的光谱。产物离子搜索和注释比对算法针对非靶向脂质鉴定进行了优化。
2、全面的数据库覆盖
LipidSearch 软件数据库包含两种以上的分子脂质种类(96 个子类)及其预测的碎片离子,并提供不同样品类型的最完整覆盖,包括细胞、人血浆、昆虫幼虫、植物、种子油、组织和酵母。
3、 样品制备
脂质标准品(表1)是从Avanti Polar Lipid(Alabaster,AL)获得的粉末或氯仿储备溶液。通过组合储备溶液来制备21种不同脂质标准品的混合物。将脂质混合物(500μL)与100μL SPLASHTM(Avanti 330707)标记的内标混合物在甲醇中混合,并用4:2:1异丙醇/甲醇/氯仿和20mM甲酸铵稀释,得到0.1~100μg/mL的估计最终浓度范围。
4、 质谱法
在Orbitrap Fusion Lumos MS上进行质谱分析。在全MS扫描模式(m/z 200下的分辨率为120000)下操作Orbitrape Fusion Lumos-MS,然后操作ddMS2(120K分辨率)。对于MS和MS/MS扫描,AGC目标值分别设置为4E5和1E5。ms和ms/ms的最大注射时间分别为50ms和450ms。HCD是以30±10%的阶跃碰撞能量对neg进行的。在分离窗口为1.0Da的正离子模式下为30±5%。脂质混合物以3μL/min的流速注入。在Thermo Scientific上进行了额外的实验™ 轨道阱质谱仪™ HF质谱仪在240K res.下运行,MS和120K res.上运行,MS/MS扫描280.25–1000.90 Da,步长为1.0009Da。
5、 数据分析
脂质鉴定采用LipidSearch 5.0预发布软件进行。首先,使用表2中给出的参数,在MS数据中搜索用户可编辑数据库中指定的单同位素前体离子。接下来,使用表3中给出的参数进行产物离子搜索。最后,将MS和MS/MS搜索结果分别合并为总组成(前体)和分子(产物离子)结果。